Во-первых, и EcoR1, и Xba1 оставляют 5'-выступы, когда переваривают ДНК (как и Nde1). В обоих случаях 3'-конец утоплен, поэтому полиэрмаза может добавлять основания. Во-вторых, все полимеразы могут добавлять основания только к 3'-концу, поэтому Кленов добавит 4 основания к отступившему 3'-концу обоих сайтов, чтобы получить тупые концы.
Оставляют ли ферменты рестрикции 5-фосфат?
Вектора и вставки, расщепленные рестрикционными ферментами, содержат необходимые концевые модификации (5'-фосфат и 3'-гидроксил), в то время как фрагменты, созданные полимеразной цепной реакцией (ПЦР), могут не содержать.
Можно ли лигировать тупые концы?
Лигация тупых концов
Лигация тупых концов не включает спаривание оснований выступающих концов, поэтому любой тупой конец можно лигировать с другим тупым концом. Тупые концы могут быть образованы ферментами рестрикции, такими как SmaI и EcoRV.
Производит ли полимераза Taq тупые концы?
Да… Полимераза Taq добавляет A-выступы, если вы сохраняете последний этап удлинения при 72 dC в ПЦР. В основном используется для клонирования TA.
Зачем использовать фрагмент Кленова при секвенировании ДНК?
Фрагмент Кленова чрезвычайно полезен для исследовательских задач, таких как: Синтез двухцепочечной ДНК из одноцепочечных шаблонов . Заполнение отступающих 3'-концов фрагментов ДНК, чтобы сделать 5'-выступ тупым . Переваривание выступающих 3-футовых свесов.
