Трипсинизация - это процесс диссоциации клеток с использованием трипсина, протеолитического фермента, расщепляющего белки, для отделения прилипших клеток от сосуда, в котором они культивируются. При добавлении в клеточную культуру трипсин расщепляет белки, которые позволяют клеткам прикрепляться к сосуду.
Зачем мы трипсинизируем клетки?
Трипсинизацию часто проводят для разрешения переноса клеток в новый контейнер, наблюдения для экспериментов или уменьшения степени слияния в колбе путем удаления процента ячейки.
Как трипсин отщепляет клетки?
Трипсин/ЭДТА – это комбинированный метод отделения клеток. Трипсин разрезает белки адгезии во взаимодействиях клетка-клетка и клетка-матрикс, разрезая аминокислоту белков адгезии, в частности, по лизину или агинину на С-конце, если вышележащая аминокислота не является пролином.
Как получить трипсинизированные адгезивные клетки?
Процедура
- Удаляют среду из культурального сосуда аспирацией и промывают монослой раствором соли, не содержащим Ca2+ и Mg 2+, чтобы удалить все следы сыворотки. …
- Налейте достаточное количество трипсина или раствора трипсина/ЭДТА в сосуд(ы) для культивирования, чтобы полностью покрыть монослой клеток, и поместите в инкубатор при 37 °C примерно на 2 минуты.
Как отключить трипсин в клеточной культуре?
Как только ячейки станут отделенными, добавьте 2 томапредварительно подогретых полных питательных сред для инактивациитрипсина. Аккуратно распределите среду пипеткой по поверхности клеточного слоя несколько раз, чтобы обеспечить восстановление >95% клеток. Для бессывороточных культур ингибитор трипсина сои (продукт №
