Инкубируйте сосуд при комнатной температуре в течение 2-3 минут . Прочно прикрепленные клетки можно быстро отделить при 37°С. Наблюдайте за клетками под микроскопом. Отделившиеся клетки кажутся округлыми и преломляющими под микроскопом.
Что произойдет, если трипсинизировать клетки слишком долго?
Инкубация клеток со слишком высокой концентрацией трипсина в течение слишком длительного периода времени повредит клеточные мембраны и убьет клетки. Если вы не уверены в концентрации трипсина, используйте низкую концентрацию.
Как вы трипсинизируете клетки?
Клетки можно ресуспендировать, осторожно пипетируя клеточную суспензию, чтобы разбить комки. При необходимости можно сделать дополнительное разведение для подсчета клеток и/или пересева.
Сколько времени требуется клеткам для прикрепления?
первые клетки прикрепляются уже через 3-5 мин! По моему опыту, большинство ЭК были прикреплены через 10-20 минут. Но чем дольше вы ждете, тем крепче привязанность.
Плохо ли трипсинизировать клетки два дня подряд?
Да, это вредно, если вы непрерывно трипсинизируете свои клетки после 24 часов расщепления. Рекомендуется делать расщепление после 48 часов расщепления. … Вы можете поддерживать клетки до тех пор, пока их морфология не станет хорошей (это зависит от типа ваших клеток, некоторые клетки могут пройти до 80 пассажей, а некоторые до 10).
